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Detección de virus de las abejas en la República Argentina

La actividad apícola en Argentina involucra actualmente algo más de 30.000 productores que cuentan con 3.900.000 colmenas. Más del 90% de la producción se destina al mercado externo. Argentina es el principal exportador de miel y el segundo productor mundial detrás de China, y representa el 70% de la miel de América del Sur, el 25% de la de América y el 6% del total mundial.

Uno de los principales obstáculos en la producción apícola son las enfermedades que pueden ocasionar innumerables pérdidas que van desde una disminución en la producción hasta una marcada mortalidad en las colmenas. Entre los agentes patógenos, los virus juegan un rol fundamental en la producción de enfermedades. En 1963 se aislaron y caracterizaron los primeros 2 virus de las abejas, el virus de la parálisis aguda de las abejas (ABPV) y el virus de la parálisis crónica de las abejas (CBPV), identificándose hasta la fecha 18 virus, muchos de ellos pueden estar presentes en la colmena, circulando sin causar sintomatología aparente.

Entre los principales agentes virales se pueden mencionar al virus de alas deformadas (DWV), el virus de la cría sacciforme  (SBV), el virus de las celdas reales negras (BQCV), el virus de la parálisis aguda de las abejas (ABPV), el virus de la parálisis crónica de las abejas (CBPV) y el virus de la parálisis israelí de las abejas (IAPV)  (8).

Los síntomas asociados a estos virus son:

Virus de las alas deformadas(DWV): Alas achicadas, rugosas, tamaño corporal pequeño, en adultos decoloración. La infección se puede observar tanto  en adultos, huevos, larvas y pupas. En pupas, multiplica lentamente y raramente causa su muerte. Pero si puede causar deformidades  y muerte temprana en nuevas abejas adultas. Las abejas adultas pueden aparecer normales pero se cree que tienen un periodo de vida mas corto. Asociado frecuentemente a Varroa destructor:

Virus de la cría sacciforme  (SBV). Afecta tanto a larvas como a estadios adultos. La larva de aproximadamente 2 días es la más susceptible. En los adultos se observa un periodo de vida mas corto. La diseminación inicial de la infección en la colmena comienza cuando las abejas se infectan al remover las larvas muertas por el SBV. Las partículas virales se acumulan en glándulas hipofaríngeas, entonces las abejas diseminan el virus cuando alimentan larvas con sus secreciones glandulares. Por otro lado otras contaminan el polen de flores con sus secreciones. El virus replica en las larvas y estas se tornan amarillos pálidos, a medida que la infección avanza, la piel se engrosa (leathery), y la larva no puede evolucionar hacia pupa ya que no puede digerir su cutícula. Las larvas quedan como un saco lleno de líquido.

El virus de las celdas reales negras (BQCV): Afecta principalmente a larvas y pupas de reinas produciendo síntomas y lesiones similares a SBV, las celdas eventualmente se vuelven oscuras. Se cree que es transmitido a larvas por la alimentación. A campo, muchos brotes se vieron asociados a Nosema apis. Algunos autores han sugerido que también puede estar asociado la transmisión a Varroa.

Kashmir bee virus (KBV): Puede infectar todos los estadíos de la abeja, y puede persistir en larvas y adultos como infecciones inaparentes. La enfermedad y mortalidad puede ocurrir sin sintomatología clara. Bajo condiciones de laboratorio es uno de los virus mas patógenos. Geneticamente, serologicamente y patológicamente relacionado a ABPV. Si bien puede permanecer subclinico, la presencia de Varroa puede activar su patogenicidad.

Virus de parálisis aguda de las abejas (ABPV): Causa muerte en un día. Puede ser detectado tanto en larvas como en adultos. Se puede encontrar en adultos aparentemente sanos. Asociada a Varroa puede ser factor de colapso de las colmenas.

Virus de la parálisis crónica de las abejas (CBPV): Puede causar dos tipos de parálisis, la forma más común se presenta con temblores del cuerpo y las alas, arrastrándose en el piso debido a la imposibilidad de volar, abdomen hinchado y alas dislocadas. En la otra forma las abejas adultas presentan cambios en su coloración que son rechazadas a la entrada de la colmena. Ambas sintomatologías pueden observarse en una misma colmena. La muerte  se observa luego de varios días. 

 Virus Paralisis Israel (IAPV) Los síntomas se asemejan a ABPV. Se lo asoció al colapso de las colmenas (CCD), cuyos cuadros son: perdida rápida de abejas adultas, con ausencia o muy pocas abejas muertas en la colmena o a su alrededor, presencia en la colmena de larvas y un pequeño grupo de adultas con la reina. Las colmenas tienen reservas de polen y miel.

Si bien la distribución de los principales virus que afectan a las abejas es mundial y a nivel de Sudamérica se ha reportado su  presencia en Brasil (1), en nuestro país no se conoce nada respecto a la prevalencia de estos virus. 

Figura 1. Sintomas de Enfermedad de alas deformadas. Figura   2. Varroa

En este trabajo, un grupo interdisciplinario constituido por investigadores de INTA, Universidades y entes provinciales, realizó un estudio para determinar la presencia de estos virus en distintos apiarios de la República Argentina. Para ello se muestrearon apiarios de las principales zonas productoras del país. En cada establecimiento se muestreron 50 abejas por colmena,  de 4-18 colmenas. Las muestras se mantuvieron a   -20ºC  hasta su posterior procesamiento. En el laboratorio, el macerado de 30 abejas fue resuspendido en buffer fosfato, clarificado y procesado con Trizol®  según las instrucciones del fabricante para la extracción del acido ribonucleico de las muestras, aplicando posteriormente  diferentes técnicas de RT-PCR para detectar la presencia de los virus.

Se procesaron un total de 174 colmenas procedentes de 23 apiarios. Del total de los apiarios muestreados, en 14 (60,87%) se detectó al menos un virus presente en la población de la colmena. En la Tabla 1 se detalla el número y porcentaje de apiarios positivos para cada virus.

 

 

DWV

SBV

BQV

APBV

CPBV

IPVB

N*

8

2

5

5

0

1

% **

35

9

22

22

0

4

Tabla 1-  Resultados de la detección de virus en los apiarios.

*N=número de apiarios donde se detectó el virus

**%=porcentaje de apiarios positivos.

 

Sobre 174 colmenas estudiadas en 63 (36%) se detectó al menos un virus presente. En la Tabla 2- Resultados de la detección de virus en las colmenas.se presentan los resultados agrupados por virus.

 

DWV

SBV

BQV

APBV

CPBV

IPVB

N

37

2

6

17

0

1

%

21

1

3

10

0

1

Tabla  2- Resultados de la detección de virus en las colmenas.

*N=número de colmenas donde se detectó el virus,

**%=porcentaje de colmenas positivas.

  

 

N

%

0

127

73

1

32

18

2

14

8

3

1

1

Tabla  3-  Número de virus detectado en las colmenas.

 

Como se observa en la tabla 3, del total de 174 colmenas, en  127 (73%) no fue posible detectar virus con esta tecnología y diseño de muestreo, en 32 (18%) se detectó un virus circulando, en 14 dos (8%) y en una tres (3%).

En la Tabla 4 se puede apreciar el cuadro completo donde se detalla los virus detectados por apiario y por colmenas.

 

 

 

 

 

 

 

 

N VIRUS DETECTADOS

 

 

 

 

 

 

 

 

COLMENAS

 

 APIARIO

DWV

SBV

BQV

APBV

CPBV

IPVB

POS**

TOT*

%

A

16

0

0

8

0

0

2

18

11

B

7

0

0

5

0

0

2

10

20

C

5

1

0

1

0

0

3

13

23

D

5

0

0

0

0

0

1

10

10

E

1

0

0

0

0

0

1

6

17

F

1

0

0

0

0

0

1

10

10

G

1

0

0

0

0

0

1

5

20

H

1

0

0

0

0

0

1

6

17

I

0

0

0

2

0

1

2

10

20

J

0

0

2

1

0

0

2

10

20

K

0

0

1

0

0

0

1

4

25

L

0

1

1

0

0

0

2

10

20

M

0

0

1

0

0

0

1

5

20

N

0

0

1

0

0

0

1

4

25

O

0

0

0

0

0

0

0

5

0

P

0

0

0

0

0

ND

0

9

0

Q

0

0

0

0

0

ND

0

4

0

R

0

0

0

0

0

ND

0

4

0

S

0

0

0

0

0

ND

0

3

0

T

0

0

0

0

0

0

0

10

0

U

0

0

0

0

0

0

0

6

0

V

0

0

0

0

0

0

0

6

0

W

0

0

0

0

0

0

0

6

0

colmenas positivas

37

2

6

17

0

1

 

174

           23

 

Tabla  4-Resultados generales de virus detectados en los apiarios.

*TOT numero de colmenas estudiadas dentro del apiario.

**POS cantidad de virus detectado en el apiario.

 

 

Figura   3 Detección de BQCV y SBV en abejas individuales.

 

 

Figura  4 Detección del virus DWV en cabeza(CA), tórax (TO) y abdomen (AB) de abejas en colmena con sintomatología clínica.

 En este trabajo se pudo detectar la presencia de 5 virus circulando en apiarios de la República Argentina: DWV, SBV, BQCV, ABPV y IAPV. Es interesante remarcar que dentro de los apiarios donde se detectó al menos un virus, no todos las colmenas estaban infectadas o al menos el porcentaje de infección estaba por debajo del límite de detección del muestreo diseñado.
En este primer estudio se buscó identificar la presencia de estos virus a nivel poblacional, por eso se analizaron un conjunto de 30 de abejas por colmena. No obstante, en algunos apiarios donde co-circulaba más de un virus, se analizaron abejas individuales, observándose que no todas las abejas estaban infectadas y en algunas se podía observar más de un virus presente (Figura 1).
Si bien la mayoría de los virus pueden producir una sintomatología visible en los infectados, normalmente las abejas poseen mecanismos defensivos a nivel individual y/o poblacional que pueden determinar que a pesar que los virus esten presentes y circulen dentro de la población de la colmena, no se observe sintomatología(5, 6). Efectivamente, muchos virus necesitan otro factor que favorezca su diseminación y/o la aparición de síntomas (ya sea favoreciendo su propagación o disminuyendo la resistencia en la población). Así es como se asocia Varroa con DWV y ABPV, Nosema apis con BQCV y IAPV(3-5). Este fenómeno puede determinar la emergencia y/o reemergencia de enfermedades o síndromes cuando coinciden todos estos factores. Por ello, el manejo eficiente de los apiarios, con protocolos probados, es fundamental para evitar o minimizar estos riesgos.

Para graficar lo complejo de las enfermedades virales, cabe destacar que si bien por estudios de metagenómica se determinó que el virus de IAPV era el principal agente presente en abejas con el síndrome CCD (2), en un estudio posterior de epidemiología descriptiva que involucró 61 variables (8), incluyendo agentes infecciosos, pesticidas y parásitos, no se pudo volver a demostrar que IAPV fuera la causa de CCD, solamente se pudo asociar a la interacción de varios agentes patógenos con la sintomatología, sugiriendo que la mayor prevalencia encontrada y el mayor número de patógenos demostrarían una mayor exposición o que la resistencia de la colmena estaba comprometida.
En el presente estudio no fue posible observar una clara asociación entre la presencia de virus y síntomas. En un solo caso se pudo detectar el virus DWV en colmenas con síntomas de la enfermedad de las alas deformadas en un establecimiento dedicado a la cría de reinas, donde se observó que estas nacían con atrofia completa de alas y varias morían dentro de la celda. Es de remarcar que en estas colmenas había un 8% de Varroa y que el manejo particular de este tipo de producción podría haber influenciado en la mayor difusión del virus y la presentación de sintomatología. El virus DWV se pudo poner en evidencia en tórax y abdomen de abejas individuales y además en Varroa.
En este trabajo (datos no mostrados) si bien se detectó virus tanto en colmenas con o sin presencia de Varroa, es interesante remarcar que en las colmenas donde el acaro estuvo presente fue donde se detectó mas de un virus circulando.
Estos datos confirman la presencia de estos virus circulando en apiarios de la Argentina y constituyen la base para posteriores estudios donde se evaluarán factores que puedan determinar un mayor riesgo de aparición de sintomatología en los apiarios.

 

Referencias

 

1.         Antunez, K., B. D'Alessandro, E. Corbella, G. Ramallo, and P. Zunino. 2006. Honeybee viruses in Uruguay. J Invertebr Pathol 93:67-70. Pubmed

2.         AUBERT Michel, BALL B, FRIES I, MORITZ R, M. N. and, and B. I. 2008. Virology and the honey bee. In Michel AUBERT, Brenda BALL, Ingemar FRIES, Robin MORITZ, N. M. and, and I. BERNARDINELLI (ed.). European Comission.Texto completo

3.         Chen, Y., J. Evans, and M. Feldlaufer. 2006. Horizontal and vertical transmission of viruses in the honey bee, Apis mellifera. J Invertebr Pathol 92:152-9.Pubmed

4.         Chen, Y., J. S. Pettis, and M. F. Feldlaufer. 2005. Detection of multiple viruses in queens of the honey bee Apis mellifera L. J Invertebr Pathol 90:118-21.Pubmed

5.         Chen, Y. P., and R. Siede. 2007. Honey bee viruses. Adv Virus Res 70:33-80. Pubmed.

6.         Evans, J. D., K. Aronstein, Y. P. Chen, C. Hetru, J. L. Imler, H. Jiang, M. Kanost, G. J. Thompson, Z. Zou, and D. Hultmark. 2006. Immune pathways and defence mechanisms in honey bees Apis mellifera. Insect Mol Biol 15:645-56 Pubmed.

7.         Teixeira, E. W., Y. Chen, D. Message, J. Pettis, and J. D. Evans. 2008. Virus infections in Brazilian honey bees. J Invertebr Pathol 99:117-9 Pubmed.

8.         Vanengelsdorp, D., J. D. Evans, C. Saegerman, C. Mullin, E. Haubruge, B. K. Nguyen, M. Frazier, J. Frazier, D. Cox-Foster, Y. Chen, R. Underwood, D. R. Tarpy, and J. S. Pettis. 2009. Colony collapse disorder: a descriptive study. PLoS One 4:e6481 Pubmed.

 

Cuadro de texto: B2
Cuadro de texto: 2-4
Cuadro de texto: 2-2
Cuadro de texto: 2-1
Cuadro de texto: B2
Cuadro de texto: 2-4
Cuadro de texto: 2-2
Cuadro de texto: 2-1
Cuadro de texto: SBV
Cuadro de texto: BQCV