Artículo 059:
Diagnóstico de Distemper Canino.
Leonardo D. Mauro MV
Profesional Independiente - Bs. As. Rep. Argentina
El Distemper es una de las enfermedades infectocontagiosas
caninas mas conocidas por los médicos veterinarios. Si bien la vacunación ha
podido controlar la enfermedad durante los últimos 30 años, se ha visto
recientemente un incremento en diversas partes de nuestro país, la Argentina, en
la incidencia de casos de Distemper, debido a la disminución de los animales
vacunados.
Resumen
El Distemper es una de las enfermedades infectocontagiosas
caninas mas conocidas por los médicos veterinarios. Si bien la vacunación ha
podido controlar la enfermedad durante los últimos 30 años, se ha visto
recientemente un incremento en diversas partes de nuestro país, la Argentina, en
la incidencia de casos de Distemper, debido a la disminución de los animales
vacunados.
Se comienza este trabajo, con un breve recordatorio sobre
la presentación clínica de la enfermedad, y luego se explican los diferentes
métodos directos e indirectos con los que cuenta el clínico practico, para poder
lograr un diagnóstico certero.
Se proveen los conceptos básicos para encontrar el método
adecuado de diagnóstico, según el momento evolutivo de la enfermedad en donde se
encuentra el paciente, que tipo de muestra remitir y por último poder
interpretar correctamente los resultados, a veces ambiguos, de dichos estudios.
Introducción
El Distemper canino es una enfermedad viral y altamente
contagiosa. Es producida por un Paramixovirus del genero Morbilivirus, la
vacunación anual suele reducir pero no eliminar su presentación, y en la medida
que la población se encuentre menos vacunada, aumentará la presentación de casos
clínicos.
A pesar de ser una enfermedad muy conocida por todos, suele
presentar cierta dificultad para la interpretación de las pruebas de laboratorio
complementarias, con el objeto de obtener un diagnóstico preciso.
Los tres elementos para su diagnóstico son el historial
clínico, el examen físico y los estudios de laboratorio. Las manifestaciones
clínicas de infección respiratoria o gastrointestinal son inespecíficas, y el
diagnóstico no debería basarse solamente en la presentación de estos signos.
Es bastante dificultoso con los estudios actuales
ante-mortem descartar categóricamente la presencia del Distemper, pues todos los
métodos utilizados pueden dar algunos falsos negativos.
Formas clínicas del Distemper
La infección por el virus del distemper canino se presenta
como una enfermedad multisistémica potencialmente fatal que puede involucrar al
SNC. Los perros pueden desarrollar un infección clínica o subclínica. Se piensa
que la mayoría de las infecciones de CDV son subclínicas o agudos leves, y que
no requieren tratamiento. La infección clínica se manifiesta de tres formas:
aguda, subaguda y crónica.
Aguda
Es la forma más común. El período de incubación (desde la
infección hasta la aparición de signos clínicos) normalmente es de 7 a 14 días.
Entre los 3 a 7 días, se presenta fiebre y leucopenia que casi siempre pasan
inadvertidas. La fiebre disminuye durante algunos días hasta que se desarrolla
una segunda fase febril, que normalmente va acompañada de conjuntivitis, rinitis
y anorexia. Los signos gastrointestinales y respiratorios como tos, diarrea,
vómitos, anorexia, deshidratación y pérdida de peso pueden seguir a
continuación. Las infecciones bacterianas secundarias a menudo complican este
cuadro.
Subaguda
Los signos del SNC pueden desarrollarse a partir de la
enfermedad sistémica como una encéfalo mielitis aguda. La presentación
neurológica incluye:
1. Contracciones bruscas involuntarias localizadas de
un músculo o grupo de músculos.
2. Paresia o parálisis que comienzan a menudo en
miembros posteriores (ataxia).
3. Convulsiones, sialorrea, movimientos masticatorios,
pedaleo de los miembros, micción involuntaria y/o defecación.
4. Hiperestesia, vocalización, reacciones de miedo.
5. Ceguera.
Dependiendo de la severidad de la infección, todos o
ninguno de los signos neurológicos pueden ser evidentes. Después de la
recuperación del distemper agudo o de una presentación inaparente, los
trastornos neurológicos pueden tardar en presentarse algunas semanas o hasta
meses. Pueden verse hiperqueratosis en las almohadillas plantares (Hard Pad
Disease) y en la nariz.
Crónica
Se han reconocido dos formas crónicas en perros adultos. La
primera se presenta a consecuencia de un proceso inmunomediado que produce una
encefalitis multifocal (Multi Distemper Encephalomyeltis) que progresa
lentamente. Esta forma normalmente ocurre en los perros de 4 a 8 años. Se
presenta con debilidad en miembros posteriores, falta de respuesta a la amenaza,
parálisis y temblores de la cabeza. La recuperación de este tipo de infección
CDV es posible.
La encefalitis crónica del perro viejo (Old Dog
Encephalitis) es un desorden progresivo que afecta usualmente a perros mayores
de 6 años. Se presenta con ataxia, movimientos en circulo, presión de la cabeza
contra objetos y cambios en la personalidad (no hay respuesta a estímulos
externos o no reconoce a los dueños).
La persistencia del virus en el SNC produce una reacción
inflamatoria, instalándose una encefalitis crónica. Estos animales no son
infecciosos.
Diagnóstico
Hematología
En casos agudos la linfopenia (común en la 1º semana) y la
trombocitopenia (menos común) son anormalidades que se presentan en forma
habitual. Puede presentarse además monocitosis. Otros cambios dependen de los
órganos afectados y de la presencia o no, de infección bacteriana secundaria.
En casos agudos, algunas inclusiones virales
intracitoplasmaticas, pueden ser vistas a veces dentro de linfocitos y
eritrocitos circulantes durante el recuento del hemograma. En casos subagudos o
crónicos estas pruebas pueden resultar negativas, aunque no se deberá descartar
la presencia del virus.
Estudios indirectos de diagnostico
Serología
De todos los métodos de diagnóstico virológicos para el
Distemper, el serodiagnóstico es el mas utilizado por los veterinarios, si bien
las pruebas son confiables, el problema se produce al interpretar los
resultados.
Inmunofluorescencia indirecta (IFI)
En base a células infectadas y la prueba de ELISA en base a
virus purificados. Si bien estas dos pruebas se usan habitualmente, en la
primera existe la intervención de un operador para la interpretación de los
resultados, lo que hace que una misma muestra pueda dar valores diferentes, en
dos laboratorios distintos.
Seroconversión
La medición de anticuerpos séricos IgM (contra
las proteínas del núcleo viral NP y P) y las IgG (contra los antígenos de la
cápsula H y F), pueden ayudar en el diagnóstico de Distemper, pero la prueba no
diferencia los anticuerpos pasivos maternales, los anticuerpos vacunales y los
anticuerpos por infecciones subclínicas, de los anticuerpos que son producto de
la enfermedad en cachorros, en animales previamente inmunizados y en los que han
tenido contacto previamente con el virus.
La detección de anticuerpos neutralizantes, precipitantes o
citotóxicos no es suficiente para el diagnóstico. Perros no vacunados,
infectados en forma aguda pueden morir sin aparición de anticuerpos
neutralizantes mientras que los infectados en forma subaguda o crónica, pueden
tener niveles de anticuerpos comparables con los perros vacunados.
La IgM puede ser detectada en perros infectados
no vacunados, entre los 6 y 8 días post infección. La IgG aparece entre los 10 y
20 días.
La prueba de ELISA para la detección de IgM
específica contra el virus de moquillo canino, es una prueba útil, ya que la IgM
en perros infectados persiste por 5 semanas a 3 meses dependiendo de la cepa y
la respuesta del huésped. En perros vacunados la IgM persiste por aprox. 3
semanas. Falsos negativos pueden observarse en perros que mueren en forma aguda,
sin la presencia de respuesta inmunitaria, y puede darse además, en
presentaciones subagudas o crónicas.
Niveles de IgG e IgM en Perros, posteriores a la
vacunación.Waner, T. et. al. "Evaluation of a rapid dot-ELISA
kit for CPV and CDV Immunoglobulin M (IgM) and G (IgG) antibodies. The
Veterinary Record.
Detección de IgG - Títulos seriados de 2 muestras
con 2 semanas de diferencia (los títulos únicos son de escaso valor), son de
valor en perros que no han sido vacunados dentro del mes anterior, un aumento de
cuatro veces o mas, entre el suero de la fase aguda y convaleciente, es señal de
una enfermedad activa.
Análisis serológico del liquido cefalorraquídeo (LCR)
(Encefalitis)
Los signos neurológicos suelen aparecer entre 1 y 3
semanas, luego que el perro se ha recuperado de los signos gastrointestinales
y/o respiratorios.
La determinación de anticuerpos específicos contra el virus
en LCR es diagnóstico de encefalitis por Distemper.
En ausencia de trauma vascular, los anticuerpos específicos
no son detectados en LCR, aún en animales previamente inmunizados.
Pueden haber falsos positivos, cuando en la toma de la
muestra hay contaminación con sangre. No obstante si el título de la muestra de
LCR es mas alto que el del suero, se considera que esos anticuerpos se han
producido localmente y demuestran una infección activa.
Puede diagnosticarse Distemper en forma presuntiva, si hay
aumento de la concentración de proteínas en LCR, pleocitosis linfocitaria, y son
detectados anticuerpos específicos en una muestra no contaminada con sangre
periférica.
La inmunosupresión es frecuente durante la infección por
Distemper, el titulo bajo de anticuerpos no puede eliminar la enfermedad y los
animales mueren.
Los anticuerpos maternales pueden persistir durante 2 o 3
meses, los cuales dan resultados serológicos positivos, aunque no son
indicativos de infección.
Cualquier anticuerpo anti-distemper encontrado en LCR es de
gran valor para el diagnóstico definitivo de Distemper.
Estudios directos de diagnóstico
Patogénesis del Distemper
Deberíamos recordar que cuando el animal se presenta en
nuestros consultorios con la sintomatología clínica de la fase aguda, ya han
pasado entre 1 y 2 semanas como mínimo, desde que el animal ha estado expuesto
por primera vez al virus, por lo tanto
Es imperativo de acuerdo a los síntomas predominantes,
intentar ubicar el lugar en donde pueda encontrarse el virus dentro del
organismo, para poder identificarlo, si es factible, con los estudios directos
de diagnóstico.
Diagnóstico definitivo
El diagnóstico definitivo requiere de la demostración de
cuerpos de inclusión intranucleares e intracitoplasmáticos eosinofílicos
(Cuerpos de Lentz) por examen citológico (coloración de Shorr, Diff Quick), o
por inmunofluorescencia directa de muestras citológicas o histopatológicas.
Los cuerpos de inclusión se pueden ver en eritrocitos y
leucocitos, sin embargo estas inclusiones están presentes solo de 2 a 9 días
luego de la infección, y no suelen estar presentes cuando los síntomas clínicos
aparecen.
Los cuerpos de inclusión pueden ser mas fácilmente
visualizados en muestras de la costra flogística o de aspirados de medula ósea
que en preparados de sangre periférica.
Las partículas virales pueden ser detectadas por
anticuerpos fluorescentes (IFA) en células de las tonsilas, ganglios linfáticos,
árbol respiratorio, hisopados conjuntivales, sedimento urinario y LCR de 5 a 21
días post infección. El test es específico, si da positivo, el perro tiene
Moquillo.
La partícula viral puede ser encontrada en las células del
LCR, en animales con signos neurológicos, en el 80% de los casos.
En raras ocasiones la vacunación reciente puede dar falsos
positivos. Más de una muestra puede ser necesaria para encontrar e identificar
el virus, en casos subagudos o crónicos estas pruebas pueden resultar negativas,
aunque no se descarta la presencia del virus. Da muchos falsos negativos.
Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
Esta prueba ya disponible en nuestro país, permite detectar
la proteína (NP) del nucleocápside viral y puede resultar positiva aún cuando
las pruebas de aislamiento y la Inmunocitoquímica no logren detectar al virus.
Es un buen método para diagnóstico temprano en perros no vacunados
recientemente.
La técnica consiste en tomar una porción clave del ARN
viral y por medios enzimáticos multiplicarla de forma exponencial; si en una
muestra hay una única molécula de ARN (indetectable por cualquier otro método),
con esta reacción, luego de 20 pasos (en ciclos de 3 a 5 minutos cada uno),
podemos obtener 1 millón de moléculas idénticas.
Comparadas con ésta tecnología, las pruebas tradicionales
de identificación y detección de anticuerpos, son casi obsoletas; un resultado
positivo de PCR nos indica, casi sin margen de error, que el ARN del agente está
presente en el animal y si está el ARN, la infección es segura.
La sensibilidad de ésta prueba ha sido incrementada
notablemente, por medio de la técnica de "nesting" (dos amplificaciones en
secuencia, siendo la segunda para un segmento aún más específico de ARN del
agente).
Una prueba de PCR puede detectar infecciones incluso al
segundo día post-infección (no debemos esperar el tiempo necesario para que se
produzca la seroconversión o respuesta inmune).
Es posible encontrar falsos positivos alrededor de 1 a 2
semanas luego de la vacunación. Un resultado positivo es un buen indicador de
enfermedad, sin embargo un resultado negativo, no descarta Distemper, sobretodo
si la muestra se toma en forma tardía durante el curso de la enfermedad, o sea
cuando la presencia y eliminación del virus han disminuido.
Biopsia de piel
Un estudio reciente descubrió que el virus del Distemper
canino puede ser encontrado en biopsias superficiales de 1 cm de piel normal del
cuello dorsal, es una prueba ante-mortem fiable (sensible y específica). El
efecto de la vacunación en esta prueba, es incierto y probablemente sea menos
confiable durante la fase neurológica avanzada de la enfermedad. Enviar la
muestra-biopsia en formol.
Necropsia/histopatología
Se deben analizar muestras de bazo, amígdalas, ganglios
linfáticos, estómago, duodeno, vejiga y cerebro, por histopatología e
inmunohistoquímica, pues el Distemper puede localizarse en diferentes tejidos.
Se puede diagnosticar con seguridad con un estudio
histopatológico hecho por un patólogo calificado. Si el Moquillo es un problema
poblacional y el diagnóstico definitivo no puede hacerse por otros métodos, una
necropsia es una inversión que vale la pena realizar en un perro muerto
sospechoso, con el objeto de establecer si el Distemper está presente o no, en
dicha comunidad.
Conclusión
Como hemos visto, existen numerosas pruebas para el
diagnóstico del Distemper, pero no existe una de elección, de acuerdo a
diferentes variables, como la historia previa vacunal del animal, el estado
evolutivo de la enfermedad, la presencia de signos neurológicos, el acceso a
laboratorios de referencia que cuenten con la tecnología adecuada y la capacidad
económica del propietario para afrontar pruebas onerosas como por Ej. el PCR, es
que definiremos cuál o cuales son las pruebas mas convenientes a las que podemos
recurrir, para llegar a un resultado adecuado.
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Fuente: www.veterinaria.org
