Análisis microbiologico de la Dirofilaria inmitis

(Microbiology study of Dirofilaria inmitis)

Boscán, Pedro; Pacheco, Nancy; Castañeda, Giovanny; Díaz, Mariano; Roas Rafael * y Asuaje, Owinch.

Decanato de Ciencias Veterinarias, Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado, Barquisimeto - Venezuela.

* Laboratorio Microbiológico del Hospital Antonio María Pineda. Barquisimeto - Venezuela.

E-Mail para contactar: doc10@LatinMail.com

 

INTRODUCCIÓN

La Dirofilariasis, es una enfermedad ampliamente conocida en la clínica de pequeños animales, donde se observan con frecuencia trastornos de tipo mecánico, inmunológicos, hemodinámicos, etc. Dichos trastornos se pueden observar en especial, después del tratamiento farmacológico con tiacetarsamida sódica (Caparsolateâ ) y en menor medida con Melarsolamine â (Rawlings et al. 1993). La patogenia de la filariasis en los caninos cursa con complicaciones que generalmente culminan en shock, ya sea durante o después de su tratamiento. Estos síntomas presentados durante el tratamiento han sido atribuidos a la toxicidad de las drogas usadas y a la respuestas orgánicas: inmunología y/o hemodinámica (Kitoh et al. 1994, Hamilton et al. 1986, Garliek 1976, Tarish y Atwell 1993).

Hasta ahora no se ha considerado la presencia de microorganismos en las filarias, como una microflora bacteriana en el parásito adulto, la cual podría ser adquirida durante su fase microlarvaria; siendo esto algo difícil de creer por que nos haría pensar en un tracto digestivo aséptico en los hospederos intermediarios. La posible presencia de estos microorganismos en la Dirofilaria inmitis podría involucrarse con la aparición de síntomas de shock que se presentan luego del tratamiento, ya que como resultado del mismo, ocurre la muerte de los gusanos en el torrente sanguíneo. El objetivo de este trabajo es destacar la existencia o no de una flora microbiana en la Dirofilaria inmitis.

MATERIALES Y MÉTODOS

Se estudiaron 144 gusanos obtenidos por extracción quirúrgica (Artecotomia Pulmonar) de 12 pacientes caninos diagnosticados previamente como positivos a Dirofilaria inmitis. Se extrajeron un total de 212 gusanos (x 17,6 gusanos por animal) y se seleccionaron al azar 144 ejemplares para su estudio microbiológico; 12 gusanos de cada paciente.

Los helmintos fueron extraidos en acto quirúrgico con material estéril de la arteria pulmonar hasta su bifurcación del ventrículo derecho; ambos sitios, considerados hábitat preferido del parásito adulto. Una vez extraídos, se colocaron en placas de petri estériles y transportados inmediatamente al laboratorio de diagnostico microbiológico del Decanato de Ciencias Veterinarias, Barquisimeto – Venezuela.

En el laboratorio se procedió a realizar el contaje y medición de los gusanos. En nuestro trabajo no consideramos de importancia la diferenciación de sexo de los helmintos.

Los 24 gusanos fueron divididos en dos grupos: A y B. El grupo A de doce gusanos fue estudiado en el laboratorio de Microbiología del Decanato de Ciencias Veterinarias y el grupo B, con los doce gusanos restantes del mismo paciente, fueron estudiados en el laboratorio de Microbiología del Hospital Central Universitario "Antonio María Pineda"de Barquisimeto – Venezuela.

En cada uno de los laboratorios las muestras fueron divididas a su vez en dos grupos. Un grupo de seis gusanos los cuales fueron cultivados en formas enteras en medio liquido, usando el medio de Thioglicolato; y el otro grupo el cual se maceró usando un mortero estéril, cultivándolos también en Thioglicolato y en medio de cultivos solidos como agar sangre, agar chocolate, agar Mac Conkey y agar salado manitol . Los medios de cultivos fueron preparados siguiendo estrictamente las condiciones de los fabricantes y los agares sangre y chocolate fueron preparados utilizando una base enriquecida añadiendo sangre a una concentración de 5 %.

Los medios de cultivo sembrados fueron incubados en estufa a 35 ^oC en una atmósfera aeróbica. El agar chocolate fue colocado en una atmósfera de CO₂ con el fin de buscar gérmenes disgónicos. Estos medios de cultivos sembrados eran observados cada 24 horas, considerándose una muestra positiva cuando hubo crecimiento bacteriano antes de los siete días de procesado. Después del crecimiento bacteriano se procedió a la identificación, estudiando las caracteristicas de las colonias desarrolladas y elaborando el diagnostico bioquímico. En todos los casos seguimos las normas de clasificación del manual de Bregey’s (Holt y Krieg 1991) y se confirmo el diagnostico bacteriano usando el sistema APIZOE de la Biomeriux.

RESULTADOS

De las muestras se obtuvo desarrollo bacteriano en todas ellas, es decir, en el 100 %. Se observó una prevalencia de P. aeuriginosa 6 casos (37,5 %), acinetobacter sp 3 casos (18,7 %), Enterobacter agglomeraus, E. Coli y S. Aureus 2 casos (12,5 %), P. seudoalcaligenes 1 caso (6,3 %). Es de hacer notar que en todos los gusanos macerados y en 2 de los cultivos de los gusanos enteros se aislarón más de un genero bacteriano, este aislamiento polimicrobiano en cada uno de los gusanos, hace pensar en la presencia de bacterias anaeróbicas, por lo tanto seria interesante la determinación de esta flora microbiana en estudios futuros.

DISCUSIÓN

Nuestros resultados arrojaron crecimiento bacteriano en un 100 % de los gusanos procesados, observándose el aislamiento de bacilos Gram negativos en todos los grupos cultivados; con predominio evidente del genero de las Pseudomonas. Igualmente se obtuvo crecimientos de otros bacilos no fermentadores de glucosa como el Acitobacter sp., especies ampliamente distribuidas en el ambiente: principalmente agua, suelos, vegetales, materia en descomposición; en el cual no es muy distinto el hábitat de las enterobacterias aisladas como la E. Coli y E. Agglomerans. La presencia de estos géneros bacterianos nos invita a considerar la intervención de microorganismos durante el ciclo evolutivo del parásito, que pueden ser trasladados de un hospedador a otro, ya que los estadios desde la L₁ hasta la L₃, cuyo desarrollo ocurre en el tracto digestivo de los hospedadores intermediarios que son insectos hematófagos del genero Aedes, Culex y Anopheles (Souslby 1989, Lapage 1975); donde es posible la contaminación con gérmenes habitantes naturales de este sistema. Igualmente, los gérmenes Gram positivos en especial los cocos pueden ser adquiridos cuando los estadios larvarios se ubican en la fosa del labium de los insectos o en su contacto con el medio externo al ser inoculados en el hospedador natural.

El mayor aislamiento de bacterias en las muestras maceradas, nos permite considerar a estos géneros como parte integrante de las cavidades internas de los gusanos y asociar el crecimiento bacteriano en los gusanos enteros con la liberación de una sustancia mucosa, al ser colocados en cualquier medio. Esto nos hace pensar que al hacer cultivos microbiológicos del tracto digestivo de los insectos hematófagos y de las microfilarias circulantes en sangre periférica, se deberían aiislar los mismos géneros bacterianos, ensayos que no se deben dejar pasar por alto para llegar a la conclusión de presencia o no de una flora microbiana como habitantes naturales de las Dirofilarias inmitis.

El impacto clínico de este estudio no esta del todo resuelto; ya que la presencia de bacterias en los gusanos adultos a nivel de hospedero, deberían acarriar con la aparición de síntomas de bacterias o endotoxemia en todos los pacientes con dirofilariasis; pero la escasa carga bacteriana presente, puede permitir su eliminación eficaz por la respuesta inmune humoral y/o celular del paciente comprometido. Pero de ser esta la situación, los pacientes con Dirofilariasis crónica mantienen niveles controlables de microorganismos en sangre y cuando ocurre la desintegración masiva de filarias en el aparato cardiovascular, todo su contenido es liberado al torrente circulatorio, donde elevados niveles de bacteremia y endotoxemia súbita, puedan colaborar con el cuadro de shock instaurado por la misma droga y las partículas parasitarias per se. De ser así, se debería considerar en el protocolo de tratamiento el uso de antimicrobianos en especial para gérmenes gram negativos, los cuales poseen la fracción lipídica A que es considerada la más endotóxica de todas las fracciones de las bacterias (Purvis and Kirby 1994).

BIBLIOGRAFIA

1. Holt J. Y Krieg N. Begey’s Manual of Determinative Bacteriology. Ninth Edition. Williams & Wilkins. 1991.
2. Kitoh K., Watoh K., Chaya K.,Kitagawa H. And Sasaki Y. Clinical, hematologic, and bichemical findings in dogs after induction of snock by injection of heartworm extract. Am J vet Res 1994; 55: 1535 – 1541.
3. Kitoh K., Watoh K., Kitagawa H. And Sasaki Y. Blood Coagulopathy in dogs with shock induced by injetion of heartworm extract. Am J vet Res. 1994; 55: 1542 – 1547.
4. Mac Faddin J. Biochemical test for indentification de Medical Bacteria. Williams & Wilkins. 1980.
5. Prietog, Castillo M. Y Vargas. Curso teórico2. Daló práctico sobre la identificación de bacilos Gram negativos no – fermentadores de la glucosa. Universidad del Zulia. 1994.
6. Purvis D. & Kirby R. Systemic inflamatory response syndrome: septic shock. Vet Clin North Am. 1994; 24 (6): 1225 – 1245.
7. Rawlings C., Raynaud J., Lewis R. Duncan J. Pulmonary trhomboembolism and hipertension after thiacertarsamide vs melarsolamine dihydrocholoride treatment of Dirofilaria inmitis infection in dogs. Am vet Res. 1993; 54 (6): 920 – 925.
8. Soulsby J. Parasitología y enfermedades parasitarias de animales domésticosN. & Larson A. Effects of . Edit. Interamericana. 1989.

 

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